一、污染類型識別

細菌污染

顯微鏡下可見球形或桿狀微生物，培養液迅速渾濁并散發異味，細胞生長停滯。

真菌污染

培養液保持清亮，但可見絲狀或珊瑚狀菌絲，細胞狀態逐漸惡化。

支原體感染

細胞生長緩慢，出現小黑點或空泡化，但培養液無明顯渾濁。

黑膠蟲污染

顯微鏡下可見點狀游動小體，對細胞生長影響較小，但可能干擾觀察。

二、清除技術方案

（一）細菌與真菌污染處理

抗生素處理

在培養基中添加慶大霉素（50-100μg/mL）或兩性霉素B（2.5μg/mL），連續處理3-5天。需注意長期使用可能影響細胞代謝。

物理清除

對污染嚴重的細胞系，建議棄用并徹-底消毒培養箱（75%酒精擦拭+紫外線照射），更換水盤為飽和硫酸銅溶液。

（二）支原體清除方案

專用培養基

使用含Plasmocin的支原體清除培養基，處理周期需持續2-3周。

聯合處理

結合四環素類抗生素（10μg/mL）與細胞凍存復蘇，通過低溫沖擊清除頑固支原體。

（三）管路系統污染防控

生物膜清除

采用復合型過氧化氫（H2O2）溶液循環沖洗管路，3-5分鐘可穿透生物膜結構，殺滅銅綠假單胞菌等頑固微生物。

長效抑菌

處理后在管路內壁形成納米級抑菌層，有效降低氣溶膠傳播的霉菌污染風險。

三、預防體系構建

三級細胞庫管理

建立主細胞庫（MCB）、工作細胞庫（WCB）和實驗細胞庫（ECB），每代次進行支原體PCR檢測。

操作規范

嚴格執行雙人核對制度，超凈臺內物品擺放不超過工作區1/3面積，定期更換HEPA濾膜。

環境監測

每周對培養箱、超凈臺進行沉降菌檢測，保持相對濕度<60%以抑制真菌繁殖。